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| Cactus | صبار | Cactus |
| Peroxydase | بيروكسيداز | Peroxidase |
| Ecotype | نمط بيئي | Ecotype |
Les peroxydases (EC 1.11.1.7) sont des enzymes d'oxydoréduction qui oxydent un substrat défini en présence de peroxyde d'hydrogène (H₂O₂). Ce sont des antioxydants enzymatiques majeurs. Elles reconnaissent des substrats naturels (gaïacol) ou synthétiques (o-dianisidine). L'oxydation du gaïacol produit du tétraguaiacol (absorbance à 470 nm), réaction classique pour tester l'activité peroxydasique.
L'oxydation de l'o-dianisidine, un substrat synthétique conduit à un produit oxydé selon la réaction:
Au Maroc, plusieurs recherches visent à identifier les meilleurs écotypes de figuier de Barbarie. Des arboretums ont été constitués pour évaluer la croissance, la productivité et l’adaptation aux conditions locales. Les clones les plus performants sont multipliés végétativement. Dans cette optique, les peroxydases solubles (S) et pariétales (ioniquement liées, I) se sont révélées être des marqueurs précoces et fiables.
Les écotypes tardifs 'Haddaouia' et 'Moussa' présentent une activité peroxydasique soluble élevée (unités par gramme de matière fraîche). L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide a mis en évidence des isoformes acides liées à la paroi, migrant rapidement, caractéristiques des écotypes des régions proches de Marrakech.
Abstract
When compared with o-dianisidine peroxidase, guaiacol peroxidase extracted from acetone powder prepared from cladodes of 10 ecotypes of Opuntia ficus indica L., was found to be less active in 90% of total ecotypes. In addition, lag time kinetics altered seriously guaiacol peroxidase tests. A part of 80% of ecotypes showed lag time kinetics with guaiacol substrate versus 10% for o-dianisidine. Filtered extracts on Sephadex G-25, containing low amounts of small molecules (such as antioxidants), did not show lag phases. This data support the hypothesis of involvement of small size antioxidants in the appearance of lag time. At this semi-purification level, the enzyme showed low affinity towards guaiacol. In addition, adding ascorbic acid (AsA) as exogenous antioxidant, to the guaiacol peroxidase reaction medium, led to the reappearance of lag time, where its increase follows increases in AsA concentrations. A positive correlation (coefficient 0.86) between lag times and AsA concentrations was established. The addition of copper (known as oxidant of ascorbic acid) in the reaction mixture affected the lag phase behaviour. At a final concentration of 0.5-1.0 mM, Copper abolished completely a lag time of about 120 s, allowing guaiacol peroxidase reaction to start immediately. Electrophoretic analysis of acidic peroxidases on 6-15% gradient polyacrylamide gels followed by in situ revelation using reaction mixtures containing 0.5-1.0 mM Cu++, allowed the appearance of new fast isoforms (Rf 0.66-0.68) which are absents in controls. Contrarily, Staining gels with substrate solutions containing 0.10 mM and 0.15 mM AsA, led to the disappearance of isoperoxidases at zones A1 (Rf 0.29), A2 (Rf 0.52) and A4 (Rf 0.72). A time-dependant and zone-dependant reappearances of isoperoxidases were noted after 30 min incubation. These results are discussed in respect of optimizing quantitative and qualitative aspects of guaiacol peroxidase in Opuntia ficus indica L.
Les peroxydases acides liées à la paroi (fraction I) présentent des isoformes rapides (Rf 0,42–0,58) particulièrement actives chez les écotypes du cactus (Opuntia ficus indica L.) collectés autour de Marrakech. À l'inverse, les écotypes éloignés (y compris tardifs) montrent une isoperoxydase acide rapide spécifique (Rf 0,58). Les peroxydases basiques solubles (fraction S) sont également discriminantes. Ces travaux confirment l'intérêt des marqueurs enzymatiques pour la caractérisation des ressources génétiques du figuier de Barbarie, complémentaire aux approches moléculaires.
La vidéo intégrée plus haut détaille les techniques de mesure d'activité, l'effet du cuivre et de l'acide ascorbique, et la révélation des isoformes après électrophorèse.
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📘 Liens utiles : - “Peroxydases végétales : applications biotechnologiques”
- TP S5 peroxydases, structure et fonction)
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