biochimie et biotechnologies' (thème du congrès de Marrakech 2004) couvre les résultats de plusieurs travaux de recheche portant, entre autres, sur: la production d'anticorps (antibodies, مضادات الأجسام).
| Recombinant monoclonal antibody technique occurs by cloning antibody genes into high-yield expression vectors, which are introduced into expression hosts to generate recombinant antibodies. Recombinant antibodies overcome the limitations of other methods to produce antibodies. This biotech guarantees a long-term supply for these molecules. تنتج تقنية إنتاج الأجسام المضادة أحادية النسيلة المؤتلفة عن طريق استنساخ جينات الجسم المضاد في نواقل التعبير عالية الإنتاجية ، والتي يتم إدخالها في مضيفات التعبير لتوليد أجسام مضادة مؤتلفة. تجتاز الأجسام المضادة المؤتلفة قيود الطرق الأخرى لإنتاج الأجسام المضادة. تضمن هذه التقنية الحيوية إمدادًا طويل الأجل لهذه الجزيئات. |
Monoclonal C5-1 antibody produced in transgenic alfalfa plants exhibits a N-glycosylation that is perfect for glyco-engineering into human-compatible structures
M. BARDOR1,2*, C. LOUTELIER-BOURHIS3, T. PACCALET1, P. COSETTE4, A-C. FITCHETTE1,
L-P. VEZINA5, S. TREPANIER5, M. DARGIS5, R. LEMIEUX6, C. LANGE3, L. FAYE1
& P. LEROUGE1
1 CNRS-UMR 6037, 3 CNRS-UMR 6014 and 4 CNRS-UMR 6522, IFRMP 23, Université
de Rouen, 76821 Mont Saint Aignan, France. 5 Medicago. inc., 1020, Route
de l'église, Bureau 600, Sainte-Foy, Québec, Canada, 6 Héma-Québec, 2535, boulevard Laurier, Sainte-Foy, Québec, Canada. 2 Present address: University of California, San Diego, CA, USA.
Abstract: The perennial legume crop, Medicago sativa (alfalfa), benefits from several agronomic advantages such as the existence of agricultural infrastructures and the possibility to rapidly produce clonal transgenic populations, making it a good candidate for molecular farming applications. The expression
of C5-1 monoclonal antibodies in this plant results in the production
of a functional and fully assembled molecule, easily purified using a
one-step procedure. Structural analysis of the plant-derived antibody
show that the recombinant C5-1 bears N-glycans having a a(1,3)-fucose,
a ß(1,2)-xylose and two terminal GlcNAc residues linked to the core
Man3GlcNAc2. As a consequence, alfalfa plants have the ability to produce
high yield of recombinant IgG harbouring a N-glycosylation that is perfect
for in vitro or in vivo glycan remodeling into a human-compatible plantibody.
For instance, as proof of concept, in vitro galactosylation of the alfalfa-derived
C5-1 antibody results in a plantibody harbouring terminal ß(1,4)-galactose
residues as observed in the mammalian IgG1.
Key words: alfafa (Medicago sativa), glyco-engineering, N-glycosylation, recombinant
antibodies, transgenic plants.
Ingénierie et évaluation fonctionnelle d'un fragment d'anticorps recombinant (Fab) dirigé contre la toxine AahI de scorpion
J. MUZARD, N. AUBREY, P. BILLIALD
Laboratoire Lerai, USM 505, Muséum National d'Histoire Naturelle, 57, rue Cuvier, 75005 Paris, France. E-mail : julien.muzard@free.fr
Résumé:L'immunothérapie passive qui consiste à administrer à un patient des anticorps (ou fragments d'anticorps) immuns est le seul traitement spécifique
des envenimations. Cette approche thérapeutique n'a pas connue
de véritables améliorations depuis sa découverte
(1896) et repose toujours sur l'utilisation de fragments d'anticorps
(Fab ou F(ab)'2) polyclonaux équins (Toxicon, 2003, 41 : 541-57).
Les anti-venins ainsi produits présentent de nombreux inconvénients
liés d'une part à leur mode de préparation (hétérogénéité inter-lots ; risque de transmission d'agents infectieux ; faible concentration d'anticorps neutralisants) et d'autre part, aux risques toujours associés
à l'administration de protéines hétérologues
(réactions d'hypersensibilité).
Aujourd'hui, l'ingénierie Moléculaire et la bonne connaissance
de la structure des anticorps permettent de concevoir de nouveaux formats
d'anticorps thérapeutiques à potentiel évolutif.
Plusieurs de ces molécules ont déjà été
évaluées dans le laboratoire (FEBS Lett., 1999, 442 :183-8
; Cell. Mol. Life Sci., 2003, 60 : 617-28).
A partir de l'hybridome 9C2 sécréteur d'une IgG murine neutralisant
l'action de la toxine AahI du venin de scorpion Androctonus australis,
nous avons construit un fragment d'anticorps de type Fab (rFab), produit
par des bactéries et purifié par chromatographie sur gel
d'agarose couplé à la protéine L. L'affinité
de la protéine recombinante pour la toxine est très élevée
(KD = 8,2 10-11 M), comparable à celle de l'anticorps naturelle.
Le pouvoir neutralisant du rFab a également été évalué
de façon comparative avec d'autres formats d'anticorps. Les résultats
obtenus seront détaillés.
L'ingénierie Moléculaire offre la possibilité d'améliorer ou de moduler les caractéristiques fonctionnelles et structurales du fragment d'anticorps Fab, ce qui ne peut être envisagé pour les fragments d'anticorps produits par les méthodes conventionnelles (Fab et F(ab)'2).
Mots clés : Scorpion, Anticorps, Immunothérapie, Toxine,
Fab.
Production de protéines recombinantes d'intérêt thérapeutique chez la
luzerne, après inactivation de l' (1,3)-fucosyltransférase
et de la (1,2)-xylosyltransférase
C.SOURROUILLE, MC.KIEFER-MEYER, S.PAGNY, MA.D'AOUST*, L. FAYE V.GOMORD
CNRS UMR 6037, IFRMP23, G3, UFR des sciences, Université de Rouen, Bâtiment
Extension de biologie 76821 Mont Saint Aignan, France, *Medicago inc,
2480, rue Hochelaga Sainte-Foy, Québec, G1K 7P4, Canada.
Les
études menées ces dernières années ont démontré
que les plantes sont un formidable outil pour produire des protéines
recombinantes. En effet, les plantes présentent de nombreux
avantages par rapport aux systèmes de production comme les bactéries
ou les levures. Tout d'abord, dans les systèmes végétaux,
il est possible de produire des protéines d'intérêt
à grande échelle et à faible coût. Ensuite,
les modifications co- et post-traductionnelles, telles que le repliement
et la glycosylation, sont en grande partie identiques chez les plantes
et chez les mammifères. Ainsi, les protéines hétérologues
exprimées dans les plantes, sont en général actives
et stables.
Cependant, pour la production de protéines recombinantes d'intérêt
thérapeutique destinée à l'homme, les plantes ne
sont pas encore idéales. En effet, les étapes tardives de
la glycosylation au niveau de l'appareil de Golgi diffèrent chez
les plantes et chez les mammifères. Deux glycosyltransférases
typiquement végétales, l' (1,3)-fucosyltransférase
et la (1,2)-xylosyltransférase transfèrent du fucose lié
en (1,3) et du xylose lié en (1,2) sur les N-glycannes des glycoprotéines
végétales et donc aussi des glycoprotéines recombinantes
produites dans les plantes transgéniques. Ces deux résidus
sucres
confèrent à la protéine d'intérêt un
potentiel immunogène pour l'homme, ce qui restreint leur utilisation
thérapeutique.
Récemment, nous avons cloné et caractérisé
pour la première fois, l' (1,3)-fucosyltransférase et la
(1,2)-xylosyltransférase chez une légumineuse modèle
: la luzerne (Medicago sativa). L'activité et la spécificité
de ces enzymes
ont été analysées par expression dans les cellules
d'insecte. Actuellement, différentes stratégies destinées
à inactiver ces deux glycosyltransférases sont à
l'étude, afin de diminuer ou supprimer l'ajout des sucres immunogènes
(1,3)-fucose et (1,2)-xylose sur les glycoprotéines d'intérêt
thérapeutique produites dans la luzerne transgénique.
Mots clés: Medicago sativa, N-glycosylation, glycosyltransférases, protéines recombinantes thérapeutiques.
lien utiles: protéines recombinantes pour usage thérapeutique
LIENS UTILES
ENSEIGNEMENT DE MASTER
- - Cours du Master Biotechnologies et Amélioration des Plantes, Marrakech
- Travaux pratiques Master Biotechnologies et Amélioration des Plantes, Marrakech
Faculty of Sciences, Cadi Ayyad University
Marrakech, 40000, Morocco
Email: baaziz@uca.ac.ma
Phone: 212524434649 (post 513)
Fax: 212524434669