biotechnologies logo

GENES RAPPORTEURS DANS LA TRANSGENESE ET EXPRESSION DES DES TRANSGENES CHEZ LES PLANTES


Recherche rapide dans ce site et les sites liés de l'auteur (Fr, Ar, Eng) - بحث سريع في هذا الموقع و المواقع المرتبطة للمؤلف

TRANSFORMATION GENETIQUE DE LA BETTERAVE SUCRIERE POUR L'EXPRESSION D'UN INHIBITEUR DE LA POLYGALACTURONASE D'UN CHAMPIGNON (Colletotrichum lindemuthianum).


L'expression d'un transgène dépend de la présence d'un promoteur choisi pour permettre sa transcription afin de répondre aux tâches voulues comme: 1/ Synthèse plus ou moins accentuée d'une protéines, 2/ Expression exclusive voulue au niveau d'un organe précis de la plante (feuille, racine, graines…) et Expression lorsque des conditions environnementales précises (présence de parasites, température, …) sont réunies. Ce sont des régulations spatio-temporelles strictes.


Aller au Sommaire du cours

Sur cette même page:

Visualisation de l'expression des transgènes à l'aide des gènes rapporteurs dans la transgénèse des plantes. Exemples de gènes rapporteurs dans la transgénèse des plantes
---- Gène LacZ codant pour la béta-galactosidase de la bactérie E coli.
---- Gène codant pour la GFP (green fluorescent protein)
---- Gène gus (béta-glucuronidase)

- Régulation de l'expression des gènes
- Fusion transcriptionnelle et fusion traductionnelle
- Gènes rapporteurs. Fusion transcriptionnelle et fusion traductionnelle


Visualisation de l'expression des transgènes chez les plantes régénérées à l'aide des gènes rapporteurs dans la transgénèse des plantes

Comme pour le gène de sélection (gènes marqueurs), le choix du gène rapporteur doit se faire en fonction de la nature du matériel végétal. En effet, certaines plantes ont des activités endogènes qui sont capables de masquer l’expression d’un gène rapporteur.
Après transformation et régénération d’une plante, on peut distinguer 3 cas, dont 1/ La plante régénérée n’est pas transformée, mais naturellement résistante à l’agent de sélection, 2/ L’ADN-T peut avoir été transféré partiellement. Le gène de résistance à l’antibiotique est présent, mais pas le gène rapporteur (ou en partie) et 3/ Les 2 gènes ont été transférés. Certains gènes-rapporteurs peuvent parfois être utilisés comme gènes marqueurs.


Gène LacZ codant pour la béta-galactosidase de la bactérie E coli


. L'activité enzymatique de la béta-galactosidase (hydrolyse des béta-galactosides) est mesurée avec un substrat (X-Gal = 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-béta-D-galactopyranoside) dont l'hydrolyse donne un produit coloré bleu.

X-Gal + H2O ----- Gal + X

X-gal, galactosidase

La visualisation de l'activité enzymatique codée par le gène LacZ requiert la fixation préalable des tissus et ne peut donc pas être employé pour marquer des cellules vivantes. Aussi, l'existence d'activité béta-galactosidase endogène chez bon nombre de plantes fait que cette méthode est peu usitée (Hooykaas & Schilperoort, 1992).

Pour pouvoir métaboliser le X-gal, la cellule doit être exposée à un inducteur, l'isopropyl béta-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG), proche du lactose.

LacZ gene, galactosidase

LIRE LA SUITE




Biochimie 3D

BIOTECHNOLOGIES VERTES AU MAGHREB

Biochimie multilingue (Ar). Téléchargement de fichiers


-
transgénèse. Gènes rapporteurs, expression des transgènes