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ELECTROPHORESE DES ISOENZYMES CHEZ LE PALMIER DATTIER (Phoenix dactylifera L.), INTERPRETATION DES ZYMOGRAMMES ET ETUDE DE LA DIVERSITE GENETIQUES DES PALMERAIES AU MAROC A L'AIDE DE BIOSYS-1

Après leur séparation par électrophorèse, les isoenzymes du palmier dattier sont utilisées pour l'étude de la diversité génétique des palmeraies au Maroc.
بالإمكان قرائة أصل واحة نخيل مراكش بالمغرب من خلال جزيئات أوراقه ؟؟؟


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Isoenzymes, isozymes إيزوزيمات، أشباه أنزيمية Isoenzymes, isozymes
Electrophorèse كهرتهجير Electrophoresis
Palmier dattier
نخيل التمر
Date palm
Palmeraie de Marrakech واحة مراكش Marrakech palm grove




Polycopié TP 1 + 2 (pdf) -- Interrogation TP1 -- Contrôle TP


TP1. Eléctrophorèse. Technique de séparation selon la charge électrique et la taille des molécules


L'électrophorèse des enzymes extraites de feuilles de palmier dattier, est réalisée dans des conditions non dénaturantes. Tout chaffage du système est éliminé par refroidissement continu assuré par un cryostat. La mobilité électrophorétique d'une molécule peut-être exprimée par la relation : Mobilité = k . (pH - pI)/masse molaire, où pI est le point isoélectrique de la molécule et pH, le pH du tampon de séparation.

Le principe de l'electrophorèse et le détail de la technique peuvent être revus en vistant le lien correspondant.


Echantillonnage, Extraction des enzymes et préparation des gels de polyacrylamide, support de migration en électrophorèse.

Afin de pouvoir interpréter les résultats à l'échelle de la génétique des population, l'échantillonnage doit concerner un nombre élevé de palmiers. Le matériel doit être aussi varié que possible pour couvrir toute la diversité de l'espèce. L'extraction des isoenzymes se fait à l'aide d'un tampon 'TAMET' (pH 7,0) de composition: Tris 0,5 M, Acide ascorbique 0,3 M, 2-mercaptoéthanol 2% (v/v), EDTA Na2 0,01 M et Triton X-100 0,8% (v/v) (voir détail dans le polycopié).



Electrophorèse

L'électrophorèse est réalisée sur un gel de polyacrylamide de concentration 11% (avec un gel de concentration de 5%). Le support de migration est préparé avant l'électrophorèse en confectionnant un moule à l'aide de deux plaques de verres séparées l'une sur l'autre par des bandes plastiques d'épaisseur 1 mm.

Lorsque le gel sont prêts, les extraits enzymatiques préalablement préparés à partir des feuilles de palmier dattier, seront déposés sur le gel pour être séparés.



Révélation des isoenzymes et interprétation des zymogrammes

Une fois l'électrophorèse est terminée, les gels (ici 2) sont révélés pour les enzymes choisies. Dans le premier TP on révèle deux enzymes simples, les estérases (EST) et les peroxydases (POX), une enzyme par gel. Dans le deuxième TP on analyse deux autres enzymes, révélées in situ; l'endopeptidase (ENP) et la Glutamate Oxaloacétate Transaminase (GOT)..

Par vidéo. Déroulement de la séance du travail pratique (TP) sur le marquage de type isoenzymes chez le palmier dattier:



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Palmier dattier. Electrophorèse des isoenzymes, Biosys