'biochimie
et biotechnologies' (thème du congrès de Marrakech 2004)
couvre les résultats de plusieurs travaux de recheche portant,
entre autres, sur: la production d'anticorps
(antibodies).
Ingénierie
et évaluation fonctionnelle d'un fragment d'anticorps recombinant
(Fab) dirigé contre la toxine AahI de scorpion
J.
MUZARD, N. AUBREY, P. BILLIALD
Laboratoire
Lerai, USM 505, Muséum National d'Histoire Naturelle, 57, rue Cuvier,
75005 Paris, France. E-mail : julien.muzard@free.fr
L'immunothérapie
passive qui consiste à administrer à un patient des anticorps
(ou fragments d'anticorps) immuns est le seul traitement spécifique
des envenimations. Cette approche thérapeutique n'a pas connue
de véritables améliorations depuis sa découverte
(1896) et repose toujours sur l'utilisation de fragments d'anticorps
(Fab ou F(ab)'2) polyclonaux équins (Toxicon, 2003, 41 : 541-57).
Les anti-venins ainsi produits présentent de nombreux inconvénients
liés d'une part à leur mode de préparation (hétérogénéité
inter-lots ; risque de transmission d'agents infectieux ; faible concentration
d'anticorps neutralisants) et d'autre part, aux risques toujours associés
à l'administration de protéines hétérologues
(réactions d'hypersensibilité).
Aujourd'hui, l'ingénierie Moléculaire et la bonne connaissance
de la structure des anticorps permettent de concevoir de nouveaux formats
d'anticorps thérapeutiques à potentiel évolutif.
Plusieurs de ces molécules ont déjà été
évaluées dans le laboratoire (FEBS Lett., 1999, 442 :183-8
; Cell. Mol. Life Sci., 2003, 60 : 617-28).
A partir de l'hybridome 9C2 sécréteur d'une IgG murine neutralisant
l'action de la toxine AahI du venin de scorpion Androctonus australis,
nous avons construit un fragment d'anticorps de type Fab (rFab), produit
par des bactéries et purifié par chromatographie sur gel
d'agarose couplé à la protéine L. L'affinité
de la protéine recombinante pour la toxine est très élevée
(KD = 8,2 10-11 M), comparable à celle de l'anticorps naturelle.
Le pouvoir neutralisant du rFab a également été évalué
de façon comparative avec d'autres formats d'anticorps. Les résultats
obtenus seront détaillés.
L'ingénierie
Moléculaire offre la possibilité d'améliorer ou de
moduler les caractéristiques fonctionnelles et structurales du
fragment d'anticorps Fab, ce qui ne peut être envisagé pour
les fragments d'anticorps produits par les méthodes conventionnelles
(Fab et F(ab)'2).
Mots
clés : Scorpion, Anticorps, Immunothérapie, Toxine,
Fab.
Monoclonal C5-1 antibody produced in transgenic
alfalfa plants exhibits a N-glycosylation that is perfect for glyco-engineering
into human-compatible structures
M.
BARDOR1,2*, C. LOUTELIER-BOURHIS3, T. PACCALET1, P. COSETTE4, A-C. FITCHETTE1,
L-P. VEZINA5, S. TREPANIER5, M. DARGIS5, R. LEMIEUX6, C. LANGE3, L. FAYE1
& P. LEROUGE1
1
CNRS-UMR 6037, 3 CNRS-UMR 6014 and 4 CNRS-UMR 6522, IFRMP 23, Université
de Rouen, 76821 Mont Saint Aignan, France. 5 Medicago. inc., 1020, Route
de l'Église, Bureau 600, Sainte-Foy, Québec, Canada, 6 Héma-Québec,
2535, boulevard Laurier, Sainte-Foy, Québec, Canada. 2 Present
address: University of California, San Diego, CA, USA.
The
perennial legume crop, Medicago sativa (alfalfa), benefits from several
agronomic advantages such as the existence of agricultural infrastructures
and the possibility to rapidly produce clonal transgenic populations,
making it a good candidate for molecular farming applications. The expression
of C5-1 monoclonal antibodies in this plant results in the production
of a functional and fully assembled molecule, easily purified using a
one-step procedure. Structural analysis of the plant-derived antibody
show that the recombinant C5-1 bears N-glycans having a a(1,3)-fucose,
a ß(1,2)-xylose and two terminal GlcNAc residues linked to the core
Man3GlcNAc2. As a consequence, alfalfa plants have the ability to produce
high yield of recombinant IgG harbouring a N-glycosylation that is perfect
for in vitro or in vivo glycan remodeling into a human-compatible plantibody.
For instance, as proof of concept, in vitro galactosylation of the alfalfa-derived
C5-1 antibody results in a plantibody harbouring terminal ß(1,4)-galactose
residues as observed in the mammalian IgG1.
Key
words: alfafa (Medicago sativa), glyco-engineering, N-glycosylation, recombinant
antibodies, transgenic plants.
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